Курсовая работа “Изучение штаммов Bacillus Subtilis с редуцированными геномами”
Автор (ы)
Аффилиация
Институт фундаментальной медицины и биологии КФУ, г. Казань, студент
Научный руководитель
Аннотация
Бактерии рода Bacillus широко используются для производства промышленных ферментов. Бациллы считаются многообещающими штаммами-хозяевами с многочисленными преимуществами, включая: нетоксичность, удобство модификации генов и высокий выход целевых белков, высокую скорость роста и низкую потребность в питательных веществах. Однако, Bacillus sp. продуцируют большое количество внеклеточных протеаз. В связи с этим, изучение и тестирование штаммов с редуцированными геномами для продукции гетерологичных белков является актуальной задачей биотехнологии.
В настоящей работе были изучены штаммы Bacillus subtilis с редуцированными геномами: 27-24 и 27-39, в геноме которых инактивированы гены спорообразования, антимикробных метаболитов, образования биопленок и внеклеточных протеиназ, а также встроена кассета comK/comS для повышения эффективности трансформации (любезно предоставлены проф. J. Altenbuchner). В качестве контрольного штамма использовали B. subtilis 168. Полученные данные станут основой для использования штаммов с редуцированными геномами в качестве клеток-реципиентов для получения рекомбинантных белков.
Целью работы являлось изучение штаммов Bacillus subtilis с редуцированными геномами.
Рабочая гипотеза заключается в том, что штаммы Bacillus subtilis с редуцированными геномами: 27-24 и 27-39 предположительно обладают меньшей протеолитической активностью по сравнению с контрольным штаммом B. subtilis 168, а также являются полезными для использования в качестве продуцентов рекомбинантных белков свойствами.
Для достижения поставленной цели в работе решались следующие задачи:
- Изучить динамику роста штаммов B. subtilis с редуцированными геномами и штамма B. subtilis 168.
- Определить динамику накопления протеолитической активности штаммов B. subtilis с редуцированными геномами.
- Определить динамику накопления фосфатазной активности штаммов B. subtilis с редуцированными геномами.
Установлено, что штамм B. subtilis 168 и штаммы B. subtilis с редуцированными геномами 27-24 и 27-39 достигают максимальной оптической плотности к 15-18 часу. Стационарная фаза роста штамма B. subtilis 27-24 значительно короче, чем у B. subtilis 168.
Максимальная протеолитическая активность B. subtilis 168 наблюдалась на 57 час роста культуры и составила 0.81 ед/мл. Для штамма B. subtilis 27-24 максимальная активность наблюдалась в стационарной фазе роста на 45 час и составила 0.3 ед/мл. В штамме B. subtilis 27-39 протеолитическая активность оставалась на уровне менее 0.5 ед/мл на протяжении всего роста.
Максимальная фосфатазная активность в культуральной жидкости штамма B. subtilis 168 сохранялась на протяжении стационарной фазы роста, тогда как максимальная активность фосфатазы в культуральной жидкости штамма B. subtilis 27-24 наблюдалась на стадии отмирания (3.3 ед/мкл), для штамма 27-39 на середину стационарной фазы с 36 по 42 час роста (3.5 ед/мкл).
Содержание работы
Конкурс, в котором автор работы принял участие:
V Международный конкурс инициативных научно-исследовательских проектов “ВЫСОКИЕ ЦЕЛИ”, 2022/2023
Отрасль наук
Форма представления работы
Дата публикации работы: 06.02.2023
Добавить комментарий